科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級(jí)胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

那么細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都要?步驟呢？

一、常用設(shè)備

1. 準(zhǔn)備室的設(shè)備

單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲(chǔ)品柜（放置未消毒物品）、儲(chǔ)品柜（放置消毒過(guò)的物品）、包裝臺(tái)。配液室的設(shè)備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計(jì)（測(cè)量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。

2. 培養(yǎng)室的設(shè)備

液氮罐、儲(chǔ)品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(tái)（書寫實(shí)驗(yàn)記錄）。

3. 必須放在無(wú)菌間的設(shè)備

離心機(jī)（收集細(xì)胞）、超凈工作臺(tái)、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機(jī)、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）。

二、無(wú)菌操作

（一）無(wú)菌室的滅菌

1.定期打掃無(wú)菌室：每周打掃一次，先用自來(lái)水拖地、擦桌子、超凈工作臺(tái)等，然后用3‰來(lái)蘇爾或新潔爾滅或0.5％過(guò)氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％過(guò)氧乙酸，再用紫外燈照射。

3.實(shí)驗(yàn)前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘。

4.實(shí)驗(yàn)后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺(tái)、邊臺(tái)、倒置顯微鏡的載物臺(tái)。

（二）實(shí)驗(yàn)人員的無(wú)菌準(zhǔn)備

1.肥皂洗手。

2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋。

3.用75％酒精棉球擦凈雙手。

（三）無(wú)菌操作的演示

1.凡是帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面。

2.靠近酒精燈火焰操作。

3.器皿使用前必須過(guò)火滅菌。

4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時(shí)仍要過(guò)火。

5.各種操作要靠近酒精燈，動(dòng)作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。

6.吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管，防止交叉污染。

三、器械的清洗和消毒

（一）玻璃器械洗消

新的玻璃器皿的洗消

1.自來(lái)水刷洗，除去灰塵。

2.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀鹽酸中12小時(shí)以除去臟物、鉛、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小時(shí)后立即用自來(lái)水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來(lái)水沖干凈后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時(shí)，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來(lái)水沖洗15次，最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過(guò)3次。

5.烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。

6.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥，當(dāng)蒸氣成直線上升時(shí)，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，維持20-30分鐘。

7.高壓消毒后烘干